ELISAキットを使って何が試験されていますか?

複数のエピトープを有するタンパク質を検出する場合、サンドイッチアッセイが良い選択である。これは通常、異なるエピトープと反応する2つの抗体を必要とする。しかしながら、分子が複数の反復エピトープを有する場合、サンドイッチアッセイにおいて、捕捉と検出の両方に同じ抗体を使用することが可能である。あるいは、マイクロウェルに効果的に吸収することができる純粋な形態の分析物の供給がある場合、精製された分析物が固定化され、試料中の分析物が固定化分析物と標識抗体に競合的に結合する競合アッセイを設定することができる。この場合、抗体が制限されるように抗体を滴定することが必須であり、そうでなければアッセイ感度が低下する。

ポリスチレンは、コーティング溶液中のそれらの濃度に依存して、多種類のタンパク質をより増加する量で結合する。各タンパク質の特定的かつ最適な量は決定する必要があるが、抗体に対するいくつかの一般的な観察がなされている。中低結合プレートは典型的には100~200 ng of IgG/cm2まで結合し、高結合プレートは典型的に400~500 ng of IgG/cm2まで結合することができる。タンパク質に加えて、ポリスチレンプレートは、一般に長さが15〜20アミノ酸のペプチドも吸収できる。強い結合を達成するために、ペプチドは疎水性相互作用および親水性相互作用の両方を必要とする。典型的には、ペプチドを直接吸着する欠点は、それらがエピトープをほとんど持たない傾向があることである。これらがプラスチックとの相互作用に関与する場合、抗体がそれらに結合することは困難になる。1つの選択肢はスペーサーアームを介してペプチドをより大きなタンパク質に結合させることである。このスペーサーアームはペプチドとタンパク質との間の距離を提供し、抗体がペプチドと相互作用することを可能にする。

生物全体を検出する細菌アッセイまたはウイルスアッセイなどの生物は、捕捉および検出の両方について同じ抗体を用いたサンドイッチアッセイを使用することもできる。標的分子が小さいかまたは単一のエピトープからなる場合、上記の形式を修正する必要がある。小分子はそれ自体が固相によく吸着しないか、または添加されたブロッキングタンパク質によってマスクされる。しかし、一般的に小分子はより大きなタンパク質に結合することができる。これは、所望のエピトープを固相に連結させる手段を提供し、その構造によりエピトープが抗体に結合することが可能になる。 

炭水化物および高度にグリコシル化されたタンパク質は、疎水性相互作用に関与する能力がほとんどないため、上記の力によってポリスチレンによく吸着しない。細胞から放出され、界面活性剤によって溶液中に維持される膜タンパク質は、界面活性剤が存在する場合も十分に吸収されない。共有結合または界面活性剤の濃度を減少することは、これらのタンパク質を結合する最良の方法である。実際、共有結合は、Tween-20およびTriton X-100のような界面活性剤の存在下で行うことができる。