サンドイッチELISA

サンドイッチELISAはあまり一般的ではないELISA異形であるが、サンプル抗原検出において非常に効率的である。さらに、多くの市販ELISAペアセットはこのサンドイッチELISAに構築されている。

サンドイッチELISA法は最適化が困難であり、テスト済の抗体ペアを用いなければならない。これにより、抗体は標的タンパク質上の異なるエピトープを検出しているので、他の抗体結合を妨げない。

手順は次のとおりである。
1. 既知の量の捕捉抗体が結合する表面を準備する。
2.表面上の非特異的結合部位をブロックする。
3. 抗原含有試料をプレートに塗布する。
4. プレートを洗浄し、結合していない抗原を除去する。
5. 特異的抗体が添加され、抗原に結合する(この理由で「サンドイッチ」と呼ばれる。つまり、Agは2つの抗体の間に付着する)。
6.検出抗体として抗体のFc領域(非特異的)にも特異的に結合する酵素結合二次抗体を適用する。
7.プレートを洗浄し、結合していない抗体 - 酵素結合を除去する。
8. 化学物質を添加し、酵素によって色または蛍光または電気化学的シグナルに変換させる。
9.プレートウェルの吸光度または蛍光または電気化学的シグナル(例えば、電流)を測定して、抗原の存在および量を決定する。

下のイメージは、酵素に結合した二次抗体の使用を含むが、技術的意味では、一次抗体が酵素に結合している場合は必要ではない。しかしながら、二次抗体結合の使用により、検出したいかもしれないあらゆる抗原に対して酵素結合抗体を作製する高価なプロセスを回避する。他の抗体のFc領域に結合する酵素結合抗体を用いることにより、この同じ酵素結合抗体は様々な状況で使用することができる。「捕獲」抗体の第1の層がなければ、試料中の任意のタンパク質(血清タンパク質を含む)はプレート表面に競合的に吸着し、固定された抗原の量を低下させる可能性がある。抗原をプラスチックに付着させるための精製された特異的抗体の使用により、測定前の複雑な混合物から抗原を精製する必要性を排除し、アッセイを単純化し、アッセイの特異性および感度を増加させる。

特定ELISA種類の詳細情報