サンドイッチELISAの原理

サンドイッチELISAはあまり一般的ではないELISA異形であるが、サンプル抗原検出において非常に効率的である。さらに、多くの市販ELISAペアセットはこのサンドイッチELISAに構築されている。

サンドイッチELISAは、抗体の2つの層(すなわち、捕獲抗体および検出抗体)の間の抗原を定量する。少なくとも2つの抗体がサンドイッチで作用するので、測定される抗原は抗体に結合することができる少なくとも2つの抗原性エピトープを含まなければならない。モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体はどちらもサンドイッチELISAシステムにおける捕獲抗体および検出抗体として使用することができる。モノクローナル抗体は単一のエピトープを認識し、それは正確な検出および抗原の小さな差異の定量化を可能にする。ポリクローナルはよく捕獲抗体として使用され、できる限り多くの抗原をpull downする。サンドイッチELISAは、分析前にサンプルを精製する必要がなく、アッセイが非常に高感度であるが(直接または間接ELISAよりも2〜5倍高い)、ELISpotより低い。

サンドイッチELISA法は最適化が困難であり、テスト済の抗体ペアを用いなければならない。これにより、抗体は標的タンパク質上の異なるエピトープを検出しているので、他の抗体結合を妨げない。

手順は次のとおりである。(1)プレートに捕獲抗体をコーティングする。(2)サンプルを添加し、存在する抗原はいずれも捕捉抗体に結合する。(3)検出抗体を添加し、抗原に結合する。(4)酵素結合二次抗体を添加して検出抗体と結合する。(5)基質を添加し、酵素により検出可能な形態に変換する。