SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike Pseudovirus

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SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike假病毒简介

使用HIV-1(人类免疫缺陷I 型病毒)为基础载体侵染293T细胞后,包装成SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike假病毒,表面表达SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike蛋白,并携带有荧光素酶报告基因,可用于侵染过表达ACE2的细胞,荧光素酶在细胞内表达。此假病毒无自主复制能力,具有安全性高、可操作性强等特点。

SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike假病毒检测参数

(1)信号值:假病毒感染细胞(293T-ACE2)后48-72小时,Luciferase发光值可达106 RLU (Relative Light Unit)。
(2)蛋白含量:SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike S1蛋白含量860 ng/mL。
(3)拷贝数:1010 virus copies/mL。

SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike假病毒应用领域

(1)中和抗体/血清检测(需使用过表达ACE2的细胞株);


中和检测原理示意图

(2)作为替代病毒的标准品。

SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike假病毒使用指导

(1)中和检测:50µL假病毒与50 µL抗体/血清37℃共孵育1小时后,侵染过表达ACE2的细胞株,48-72小时后使用化学发光仪检测Luciferase发光值,根据Luciferase发光值计算中和抑制率。

参考试验方案:ACE2过表达293T细胞系(293T-ACE2,货号OEC001),96孔板铺板细胞密度3-5×104 /孔,假病毒用量50 -100 µL,可根据预实验结果稀释2-3倍使用。

(2)标准品:使用Triton X-100(终浓度0.5%)裂解假病毒后,可作为标准品用于ELISA等检测。
(3)缓冲液:DMEM培养基等(如需稀释,可用PBS或生理盐水)
(4)保存条件:-80℃,自收到之日起质保期1年。
(5)注意事项:建议在BSL-2级实验室使用;经验证此假病毒更适用于侵染过表达ACE2的细胞株,而在非过表达ACE2的细胞株上效果不理想(例如Vero E6、293T等)。

  • Ultra-sensitive nanozyme-based chemiluminescence paper test for rapid diagnosis of SARS-CoV-2 infection
    Author
    Liu, D;Ju, C;Han, C;Shi, R;Chen, X;Duan, D;Yan, J;Yan, X;
    Year
    2020
    Journal
    bioRxiv
    Application
    Elisa; Rapid testing based nanozyme
  • Chloroquine and hydroxychloroquine as ACE2 blockers to inhibit viropexis of COVID-19 Spike pseudotype virus
    Author
    Wang, N;Han, S;Liu, R;Meng, L;He, H;Zhang, Y;Wang, C;Lv, Y;Wang, J;Li, X;Ding, Y;Fu, J;Hou, Y;Lu, W;Ma, W;Zhan, Y;Dai, B;Zhang, J;Pan, X;Hu, S;Gao, J;Jia, Q;Zhang, L;Ge, S;Wang, S;Liang, P;Hu, T;Lu, J;Wang, X;Zhou, H;Ta, W;Wang, Y;Lu, S;He, L;
    Year
    2020
    Journal
    bioRxiv
    Application
    cell culture
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