免疫沈降/IPの紹介

IPは、抗体を用いて複雑な混合物から特定のタンパク質を富化または精製するために使用される技術である。

IPの間、抗体(モノクローナルまたはポリクローナル)は、それが認識する抗原、典型的には懸濁液中に存在するタンパク質(例えば、細胞溶解液)と免疫複合体を形成させる。次いで、免疫複合体を、固定化されたプロテインAまたはプロテインGを担持する固体支持体(例えば、アガロースまたはセファロース)上に捕捉する。固定化されたプロテインAまたはGに結合していないタンパク質を洗い流した後、免疫複合体の成分(抗体および抗原)を溶出し、SDS-PAGEで分析し、その後ウェスタンブロット(WB)分析を行い、目的のタンパク質を可視化させる。

ポリクローナル抗体とモノクローナル抗体の比較

ポリクローナル抗体 モノクローナル抗体
生産するのは安価 生産するのは高価
必要なスキルは少ない 使用される技術にはトレーニングが必要である
時間が短い ハイブリドーマは時間が長い
大量の非特異的な抗体を産生する 大量の特異抗体を産生することができる
すべての抗原上の複数のエピトープを認識する 一つの抗原上の1つのエピトープしか認識しない
バッチ間バラツキがある ひとたびハイブリドーマが作られると、それは一定で再生可能な供給源である
- バッチ間バラツキがないまたは少ない