免疫沈降/IP-HL60細胞ライセート

免疫沈降は、沈降可能なマトリックスに付着した特異的抗体に結合することによって抗原を単離する技術である。また、ゲル濾過や密度勾配沈降などの他の技術によって分離されたタンパク質分画を分析するためにも使用される。免疫沈降のための抗原の供給源は、非標識細胞または組織、代謝的または内在的に標識された細胞、またはインビトロ翻訳タンパク質であり得る。このユニットでは、種々の手段によって溶解された懸濁細胞または接着細胞を用いた広範囲の免疫沈降技術が記載された。通常、プラズマ導入された細胞または天然細胞は、免疫沈降のための理想的な試料である。

HL-60細胞株は、国立がん研究所で急性前骨髄球性白血病を有する36歳の女性に由来する。HL-60細胞は、好中球性前骨髄球(前駆細胞)であり、これはある種の血液細胞がどのように形成したかに関する実験的研究に用いられている。HL-60の倍加時間は約36〜48時間であり、栄養および抗生物質の懸濁液培養において連続的に増殖する。 

HL-60細胞の増殖は、トランスフェリンおよびインスリン受容体を介して起こり、細胞表面上に発現する。これらの化合物のいずれかが無血清培地から除去されると、HL-60増殖が直ちに停止するので、インスリンおよびトランスフェリンの必要量は絶対的である。この株の中では、ジメチルスルフォキシド(DMSO)やレチノイン酸のような化合物は成熟顆粒球の自発分化を誘導することができる。1,25-dihydroxyvitamin D3、12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA) と GM-CSFなどの化合物はHL-60を単球、マクロファージ様および好酸球の表現型にそれぞれ分化させることができる。

HL-60で培養された細胞株は、骨髄分化の分子事象および生理学、薬理学およびウイルス学的要素がこのプロセスへの影響を研究するためのヒト細胞の連続供給源になった。HL-60細胞モデルは、細胞の分化およびアポトーシスに対するDNAトポイソメラーゼ(トポ)IIαおよびIIβの効果を研究するために使用され、懸濁細胞および円形細胞を有する水性環境を必要とする誘電泳動研究において特異的に有用である。