フローサイトメトリー (FCM) /FACS | 安定性

細胞を染色した後、蛍光色素を持つ細胞がどれくらい残るかを知る必要がある。

細胞は時間の経つにつれて死ぬ、抗体は温かい温度で徐々にインターナライズされ、蛍光色素は光の中で退色 し、微生物は最終的に至る所に増殖する。

これらのすべての問題を解決するには、(染色の前後に)細胞を4℃の暗所に慎重に保存してください。細胞機能の回復に関心がなければ、すべての緩衝液にアジドのような代謝性の毒を添加してください。 フローサイトメーターで数時間以内にそれらを分析しない場合、染色後にホルムアルデヒドで細胞を固定してください。

1%ホルムアルデヒド固定は、いくつかの細胞のFSCおよびSSCを変化させ、それらのバックグラウンド蛍光を増加させ、染色蛍光をわずかに減少させるが、染色後の細胞安定性が高く、潜在的に病原性サンプルを扱う際の安全性も高い。

抗体染色細胞の一般的な手順は次の通りである。染色した後、同量の2%ホルムアルデヒドにそれらを固定し、最終的なFSC、SSCと蛍光レベルに到達するために少なくとも24時間(カバーして、寒い暗所で) 置く必要が有る。また、2週間以内にフローサイトメーターで読み取る(ただし、ほとんどの細胞はもっと長く残る)。

自分の染色をチェックしてから、リスクを担う時間を決めてください。 サイトメーターで読む取る時間を計画する面で大きな柔軟性があるため、できれば、染色後に固定してください。しかし、ここで注意することがある。Propidium Iodideのような膜不透過の染色液を使用して細胞の生存率をチェックしたり、フロー解析で死細胞をゲートアウトしたりする場合は、フローの前に細胞を固定すべきではない。 なぜなら、ホルムアルデヒド固定後にすべての細胞は死んで、色素を取り入れる。