フローサイトメトリー (FCM) /FACS | サンプル染色

Sample staining

サンプル染色

直接染色:

直接免疫蛍光染色では、細胞を蛍光色素(例えば、FITC)で直接標識した抗体と共にインキュベートする。これは、ただ1つの抗体インキュベーション工程を必要とし、二次抗体からの非特異的結合の可能性を排除したというメリットを有する。
このアプローチは細胞内染色に特に有用である。二次抗体を含む大きな抗体 - 蛍光色素複合体が捕捉されて非特異的結合を引き起こすか、または細胞に侵入して一次抗体検出を妨げることができない。

間接染色:

間接染色では、一次抗体は蛍光色素標識ではないが、蛍光色素標識二次抗体によって検出される。この二次抗体試薬は、一次抗体に対する特異性を有する抗体であってもよい。あるいは、アビジン - ビオチン系を使用することができ、それによって抗体はビオチンに結合し、蛍光色素標識アビジンで検出される。
現在、広い範囲の標識抗体が利用可能である。この方法は、多くの異なる標的に対して作成した非標識一次抗体が、標識二次抗体と共にFACS解析に使用することができることを意味する。これにより、研究者にとって標的タンパク質の選択が広がった。

細胞内染色:

フローサイトメトリープロトコルのための細胞内抗原の染色は、内部細胞タンパク質への抗体のアクセスを可能にする様々な固定および透過処理に依存する。すべての状況で、成功的な染色手順は抗体滴定による実験条件の最適化、正確にフローサイトメーターを設定するための適切なコントロール、最適化された固定および透過処理の手順に依存する。

分泌型タンパク質の検出:

タンパク質が検出前に細胞から放出されるか、急速に分解するため、分泌型タンパク質の検出は困難である。ブレフェルジンAのようなゴルジブロックは、発現したタンパク質の分泌を阻害し、ゴルジ体内にそれらを保持するために使用されている。次いで、細胞内染色法は標的タンパク質の検出に使用することができる。