フローサイトメトリー (FCM) /FACS | FAQ

どのような蛍光色素を使用できますか。

蛍光色素の選択」用のガイドがあります

どんなコントロールが必要ですか。

一次抗体結合は特異的であり、非特異的Fc受容体結合または他のタンパク質相互作用の結果ではないというのを確認するために、アイソタイプコントロールが使用される。アイソタイプコントロール抗体は、一次抗体の宿主種、アイソタイプ、および標識に適合する必要が有る。例えば、一次抗体がFITC標識マウスIgG1である場合、FITC標識マウスIgG1アイソタイプコントロールを選択する必要がある。

私たちのウェブサイトで適切な実験コントロールを見つけるには、「バックグラウンドコントロールのための推奨事項」をご参照ください。

ポリクローナル用のアイソタイプコントロール
ほとんどのアイソタイプコントロールはモノクローナルである。これらは、複数のIgGサブクラスを含むため、ポリクローナル抗体には適していない。

細胞を透過処理する必要がありますか?

詳細については、データシートを確認することをお勧めする。 あなたが検出している標的タンパク質が膜タンパク質である場合、透過処理ステップが必要でない可能性が最も高いです。 ごくまれに、抗体エピトープは、膜タンパク質の細胞質ドメインに存在し得る。 この場合、サポニンのような穏やかな透過処理試薬で透過処理する必要がある。 他の研究者が透過処理工程を必要としているかどうかを調べるには、データシート(Abreviewsやその他の画像)で入手可能なデータを確認してください。 すべての細胞質および核標的タンパク質は、抗体による検出のために細胞透過処理を必要とする。

当社の「細胞内染色プロトコール」をご参照ください。

サンプルを固定する必要がありますか?

潜在的に生物学的に有害な物質を含むサンプルは固定する必要がある。 染色が完了したら、サンプルに1〜2%パラホルムアルデヒドを添加することが薦められる。 サンプルは暗所で4℃に保管し、24時間以内に分析する必要がある。
細胞内染色の場合、手順に従って細胞を固定し透過処理する。 当社の「細胞内染色プロトコール」をご参照ください。