フローサイトメトリー (FCM) /FACS | 二重染色

マルチカラー解析用蛍光標識抗体の選択に関するコツ

• あなたの装置に最も明るい蛍光色素の組み合わせを選択してください。
• 適切な蛍光ラベルを選択することで、スペクトルの重複を最小限に抑える。
• 最も明るいラベルを最も低い発現レベルを有するタンパク質と組み合わせ、逆も同じである。
• 二次抗体を使用する際に - 二次抗体が交差反応を生じないことを確保するために、すべての一次抗体は異なる種で作成する必要が有る。二次抗体は、その種のうちの1つを排他的に認識する。
• サンプルの自己蛍光は時々問題となり、抗体の蛍光色素標識を選択する際に考慮する必要がある。蛍光顕微鏡法によってシグナルの特異性を確認する。蛍光色素を選択するときこれらのチャネルを避けるか、またはあなたの蛍光色素からのシグナルが自己蛍光よりもかなり高いことを保証する。

蛍光標識二次抗体- マルチカラー解析の場合、蛍光ラベルに結合した二次抗体は科学者に好まれる。それらの新規な電子配置のために、蛍光色素は、吸収および放出のための独特で特徴的なスペクトルを有する。単一の色素が特定の波長で励起され、別の波長で光子を放出する。あるいは、タンデム色素は、近接したドナーとアクセプター蛍光分子から成り、両者間のエネルギー移動が可能である。タンデム色素はアクセプター分子の励起波長で励起され、ドナー分子の発光波長で光子を放出する。