フローサイトメトリー (FCM) /FACS | 遠心分離と洗浄

遠心分離工程は、染色懸濁液から細胞をペレット化し、上澄み液の除去および細胞から未結合抗体の洗浄を可能にする。未結合抗体は、連続的な洗浄工程で希釈することによって除去される。異なる遠心分離機が最高速度に達するのに異なる時間を要するため、遠心分離速度に関する正確なアドバイスは不可能である。一般に、上清を細胞の喪失がほとんどなしに取り除くために、十分にじょうぶであるように細胞を回転させたいが、あまりじょうぶになると、細胞は再懸濁しにくいので注意してください。エッペンドルフチューブで染色する場合、角度の付いた回転子を備えた高速マイクロ遠心機を使用することができる。 1~2秒は、ほとんどの細胞をよくペレット化するのに十分である。ヒンジがすべて外側を向くようにエッペンドルフの蓋がローター内に配置されている場合、細胞ペレット(目に見えない場合でも)は回転後にすべてチューブのヒンジ側に位置する。次いで、ガラス使い捨て(「パスツール」)ピペットをチューブの他の(非ヒンジの)エッジに挿入することにより、上清を容易に除去することができる。使い捨てピペットは、吸引された液体が漂白剤を含むトラップに入るように、吸引するように接続する必要がある。1mlのS/W bufferの添加後、細胞をボルテックスミキサー上で再懸濁してから、再び回転させることができる。

マイクロタイタープレートウェルで染色する場合は、プレートアダプターを備えた遠心分離機を使用してください。 約1,500×gで、細胞は約2〜3秒で十分にペレット化する。遠心分離後に上清を除去するには、プレートを軽くたたき、きれいなペーパータオルで1回ブロット してください。より安全に、吸引およびトラップに接続されたガラス使い捨て(「パスツール」)ピペットで上清を各ウェルから除去することができる。洗浄バッファーはマルチチャンネルピペットで加えることができる。遠心分離があまりハードでない場合、このピペットからの噴出物は、細胞ペレットを再懸濁するのに十分である。