フローサイトメトリー (FCM) / FACS 抗体は安定性が検証されています

抗体安定性

抗体の安定性または分解も染色に影響し得る。ポリクローナル抗体の免疫グロブリン画分は、抗血清全体よりも安定性がやや低い。安定性の低減は、精製、保存および適用の方法に大きく依存する。イオン交換クロマトグラフィーのような温和な条件への暴露と比べ、アフィニティー精製法の間の極端なpH、高または非常に低い濃度の塩への暴露は通常、安定性の低減を引き起こす。最も一般的な変化は可溶性凝集物とその後の沈殿ポリマーの形成である。これらの変化はおそらく、溶液中のIgG分子間の疎水性相互作用の結果である。可溶性凝集物の存在が沈降抗体としての性能を高めることができるが、それらの疎水性の増加は非特異的結合の増加を引き起こすことが示されている。したがって、フローサイトメトリーに用いる前に、IgG画分からこれらの凝集物とポリマーを除去することは重要である。精製された抗体の保存は凝集および重合のためにそれらの疎水性を高める可能性があるため、蛍光色素のような他の分子と結合する可能性がある。

モノクローナル抗体も、精製および保存の方法によってその性能が影響されうることが示されている。

例えば、


抗原: ヒト E-CAD
抗体: E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 抗体 (PE), マウス MAb(10204-MM08-P)
細胞: MCF-7
Flow Cyt: 10^6の細胞は5 µlを使用する。 
機器: BD FACSCalibur
抗原: ヒト EGFR
抗体: EGFR / HER1 / ErbB1 抗体 (FITC), ウサギ MAb(10204-MM08-P)
細胞: A431
Flow Cyt: 10^6の細胞は5 µlを使用する。
機器: BD FACSCalibur

当社が生産した免疫化学製品は、数年まで安定であることを保証していますが、洗浄を減少させるか、または避けるために調製された抗体は希釈度が高いほど、保存期間が短くなる。ロット番号、有効期限、受領日、請求書番号を入力して試薬にログインする。これらのエントリによって、ユーザーに貴重な情報を提供し、その使用と性能を追跡する。

貯蔵

抗体を貯蔵する際に考えすべき2つの重要な要素はおそらく貯蔵容器と温度である。理想的には、タンパク質溶液の貯蔵容器は、タンパク質が吸着しない材料で作られるべきである。広く使用されているのはポリプロピレン、ポリカーボネート、ホウケイ酸ガラスがある。低濃度のタンパク質溶液(すなわち、10–100 μg/mL未満)は、bulk proteinを添加すべきである。一般に、0.1%〜1.0%のウシアルブミンで重合および容器への吸着による損失を減少させる。さらに、着色物質で作られた容器は蛍光色素の消光を防ぐので、好ましい選択肢である。容器の標識を検査する必要もある。

免疫化学試薬は、温度アラームおよび非常用バックアップ電源システムを備えた機器に保存する必要がある。凍結融解はその性能に有害な影響を及ぼすため、ほとんどの「ready to use」抗体およびそれらの複合物を2〜8℃で保存してください。これは、モノクローナル抗体を含むキット全体にも当てはまる。抗血清および免疫グロブリン画分などの濃縮タンパク質溶液は分注し、-20℃またはそれ以下で保存してください。凍結融解の繰り返しは避けてください。凍結したタンパク質溶液をゆっくりと室温に戻し、25℃以上の温度を避けてください。

フローサイトメトリー / FACSの背景知識

フローサイトメトリーは細胞膜タンパク質および細胞内タンパク質ならびにペプチドおよびDNAを評価する方法である。FACSの原理は抗原抗体反応であり、抗体が蛍光標識されている。抗体に結合する蛍光タンパク質は3つ(R-PE、APC、およびPerCP)存在する。フローサイトメトリー定量は、挿入するカラー標識(抗体なし)を用いて行う。フローサイトメトリー抗体は、細胞計数、細胞分取、バイオマーカー検出およびタンパク質工学に広く使用される。