フローサイトメトリー (FCM) / FACS 抗体は、WB、IFおよびIHCによって検証されています

フローサイトメーターは細胞の全強度として蛍光を測定するので、細胞上のシグナル(すなわち、抗体)分布に関する情報は失います。 蛍光顕微鏡は、細胞上または細胞内における蛍光シグナルの分布を調べるために使用され、そして通常、本当の陽性細胞とバックグラウンドを区別するのに役立ちます。 ウェスタンブロットは、抗体の特異性についての信頼を得るために使用されます。 免疫組織化学(IHC)染色は、適切な組織分布を確認するために使用されると同時に、抗体の特異性に関する情報も提供します。

IF / ICC、WBおよびIHCの詳細については、対応するウェブページをご覧ください。

例えば、ヒトCD147 MAbはWB、IF、IHCで検証済み:

抗原: ヒトCD147
抗体: CD147 / EMMPRIN / Basigin (10186-H08H)
細胞: A431
WB: 30 ug/lane
推薦濃度: 5-10 µg/ml
二次抗体: Dylight 800標識抗体 to Rabbit IgG (H+L)、1:5000 希釈率
抗原: ヒト CD147
抗体: CD147 / EMMPRIN / Basigin (10186-H08H)
細胞: HeLa
IF: 4% PFA含有PBSで、室温で15分間、ウサギ抗CD147モノクローナル抗体(15µg/ml) 4℃で一晩、DAPI(青色)で対比染色。
推薦濃度: 5 µg/ml 
二次抗体: Alexa Fluor® 488-conjugated Goat Anti-rabbit IgG (green), 1:500
機器: Nikon 80i
抗原: ヒトCD147
抗体: CD147 / EMMPRIN / Basigin (10186-H08H)
細胞: ヒト胃癌上皮細胞
IHC: 0.2 µg/mL、ホルマリン固定パラフィン包埋切片、クエン酸緩衝液(pH6.0)による抗原賦活化、電子レンジで15分
推薦濃度: 0.1-5 μg/ml
機器: Nikong 80i,200×

フローサイトメトリー / FACSの背景知識

フローサイトメトリーは細胞膜タンパク質および細胞内タンパク質ならびにペプチドおよびDNAを評価する方法である。FACSの原理は抗原抗体反応であり、抗体が蛍光標識されている。抗体に結合する蛍光タンパク質は3つ(R-PE、APC、およびPerCP)存在する。フローサイトメトリー定量は、挿入するカラー標識(抗体なし)を用いて行う。フローサイトメトリー抗体は、細胞計数、細胞分取、バイオマーカー検出およびタンパク質工学に広く使用される。