フローサイトメトリー (FCM) /FACS | 抗体の宿主およびクローン

SBI抗体生産フローチャート

第2世代ウサギモノクローナル抗体生産技術

モノクローナルウサギ抗体生産の第1世代技術であるウサギハイブリドーマ技術とは対照的に、Sino Biological Inc.(SBI)は、モノクローナル抗体生産の第2世代技術と呼ばれ、ファージディスプレイ抗体ライブラリー技術における比類のない専門知識に基づく、独自のウサギモノクローナル抗体生産プラットフォームを作った。

ウサギ抗体ライブラリーを作製し、ファージディスプレイ法により高親和性抗原特異的抗体を選択する。通常、1つの抗原で2つ以上のb9アロタイプのウサギを免疫し、脾臓リンパ球および骨髄細胞からの総RNAを精製し、次いでファーストストランドcDNAを合成する。異なる抗原で免疫された複数のグループの動物の脾臓および骨髄に由来するcDNAをプールして、すべての抗原の統合 ライブラリーを作製することができる。ウサギVκ/ VλをヒトCκに融合させ、ウサギVHをヒトIgG1のヒトCH1に融合させることにより、私たちのディスプレイファージミドベクターの中でキメラウサギ/ヒトFabライブラリーを作製する。

ウサギ抗体レパートリーは、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方の例外的なソースであり、高特異性、高結合力および高親和性を組み合わせた。さらに、ウサギはマウスおよびラットから進化的に遠い。結果として、げっ歯類抗原とヒト抗原との間で保存された、げっ歯類モノクローナル抗体(およびヒト免疫グロブリン遺伝子を有する遺伝子導入マウスから生成されるヒトモノクローナル抗体)にとって不可視 のエピトープは通常、ウサギ抗体によって認識され得る。ウサギモノクローナル抗体はこの制限を克服し、ウサギ抗体レパートリーから無限の供給の限定試薬を獲得するアクセスを提供した。表現型(タンパク質)および遺伝子型(cDNA)が同時に選択されるため、ファージディスプレイによって生成されるウサギモノクローナル抗体はさらなる利点を有する。また、ウサギハイブリドーマ技術と比較して、私たちのファージディスプレイプラットフォームは一度に多くの抗体クローンを産生することができる。

ウサギモノクローナル抗体のメリット

第1世代 Vs 第2世代ウサギモノクローナル抗体

  第一世代ウサギMab 第二世代ウサギMab
技術 ウサギハイブリドーマ ファージディスプレイ
抗体ライブラリー 有限 広い
スクリーニングスループット 低い Larger
エピトープカバレッジ 小さい 広い
成功率 低い 高い
抗体収量 低い 高い
クローンの安定性 低い 高い
Accessibility to Antibody Engineering 難しい 易しい

マウス Vs ウサギモノクローナル抗体

  マウス ウサギ
免疫寛容 Yes None
抗体の多様性 有限 大きい
免疫原性 小分子、ペプチドに対する反応性が弱い 小分子、タンパク質のペプチドに対する応答が優れている
親和性 低い 高い
特異性 低い 高い
アイソタイプ IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3 IgG
アプリケーション 主にWB、ELISA、IF、ペアセットとキットに適用する IHC、IP、FCM、ペアセット、キットに特に有益
抗体工学 Yes Yes

SBIは多数の免疫されたウサギ抗体ライブラリーを構築した。ウサギMAb一次抗体によって、通常、低いバックグラウンドでより特異的かつ高感度にその標的タンパク質を検出することが可能である。