ELISAトラブルシューティング – 再現性が低い

ELISAの光学密度(OD)の読み取りに関しては、共通の問題は再現性が低いことであり、つまり、96ウェルプレート内での再現性が低く、またはプレート間の再現性が低い。この部分では、これらの2つのケースにおけるELISA再現性の問題に対して、考えられる原因と関連するトラブルシューティングを提供することを目指しています。

発色しない
Development
再現性が低い
Reproducibility

1. 96ウェルプレート内での再現性が低い

考えられる原因 推奨されるトラブルシューティング
サンプルコントロールまたは試薬をアッセイプレートに添加することにかかった時間は長すぎる。 すぐに使用できるようにすべての材料をよく準備しましょう。マルチチャンネルピペットを使用し、試薬を複数のウェルに同時に添加しましょう。シェルフでサンプルを制御し、それらを同時にプレートに分注しましょう。
マルチチャンネルピペットが正しく機能しない。 ピペットの校正を確認し、チップがきつくなっていることを確認しましょう。ピペットのすべてのチャンネルが同じ量を引き出して分注することを確保しましょう。
不均一な洗浄がある、または洗浄システムが誤動作している。 洗濯機システムの性能を確認しましょう。ポートが滴るか、または分注/吸引がよくないと、システムを修理しましょう。
試料中の抗体の分布が不良であった。 サンプルを解凍または冷蔵する場合は、希釈前に混合してください。希釈されたサンプルはまた、それらをプレートに加える前に混合する必要がある。

Poor Reproducibility Plate to Plate

考えられる原因 推奨されるトラブルシューティング
プレート間のインキュベーション時間は一致しない。 プレートのインキュベーション時間が一致することを確保できるには、各プレートの時間を別々に測定しましょう。
プレート間の洗浄は不均一である。 各プレートに同じ量の洗浄液を使用してください。洗浄システムの性能を確認しましょう。ポートが滴るか、または分注/吸引がよくないと、システムを修理しましょう。
ピペットが正常に作動していない。 サンプル希釈液、サンプルおよびキットコントロールがキットボックスから取り除かれて室温になるのに十分な時間を確保してください。容積が大きくなると平衡時間が長くなる。平衡を促進するために水浴を使用する場合は、それが室温で維持されていることを確認してください。コントロール、サンプルまたは希釈剤には温水浴を使用しないでください。
キットのコントロールおよびサンプルは異なる温度であった。 正しい試薬を使用していることと、作業溶液を正しく調製していることと、汚染が発生していないことを確認してください。
試薬は異なるキットロットからである。 同時に2種類のキットロットを使用する場合は、試薬トレイなどにラベルを貼ることを確保してください。そうすると、ロット内のすべての試薬は対応するプレートとともに使用される。