ELISAトラブルシューティング - バックグラウンドが高い

ELISAバックグラウンドが高いことは、過剰な発色または高い光学密度(OD)読み値を意味することが多いです。しかし、時々、高いOD読み取り値がありますが、発色は暗くはありません。ELISAバックグラウンドが高いという問題について、考えられる原因と推奨されるトラブルシューティングがあります。 ほとんどの場合、十分な洗浄または汚染回避に注意を払うべきです。

発色しない
Development
再現性が低い
Reproducibility
考えられる原因 推奨されるトラブルシューティング
品質の悪い水を使用してプレートを洗浄し、または洗浄溶液を調製した。 水質をチェックしてください。問題がある場合は、蒸留水のような代替の水源を使用してプレートを洗浄したり、洗浄液を調製してみてください。
基質溶液が劣化した。 プレートに添加する前に基質が無色であることを確認してください。
洗浄が不十分であったり、洗濯機の性能が悪かったりする。 アッセイに推奨される最高洗浄回数を試してください。毎回の洗浄でウェルあたりに 少なくとも400μLの洗浄液が分注されることを確認してください。 洗浄システムの性能を確認してください。ポートが滴るか、または分注/吸引がよくないと、システムを修理しましょう。
洗浄システムに微生物汚染があった。 漂白剤の希釈溶液(10% by volume)でシステムを洗い流す。続いて大量の蒸留水または脱イオン水でことにより、微生物汚染を清掃する。使用前にシステムを適切な洗浄液を入れてください。汚染が重い場合は、チューブを交換する必要がある。
洗浄システムは、他の洗浄処方を含んでいた。 それぞれのユニークな洗浄液に適切なラベルが貼られていることを確認する。溶液を切り替えるときは、システムに完全に注入してください。
リーダーが誤動作しているか、または正しく表示されていない。ODの読み取り値が高く、色が暗くない場合、これは考えられる原因である。 水質をチェックしてください。問題がある場合は、蒸留水のような代替の水源を使用してプレートを洗浄したり、洗浄液を調製してみてください。
実験室の温度が高すぎたり低すぎたりした。 18-25℃の範囲内で室温を維持する。熱源の近く、直射日光の当たる場所、通気口の近くでは、アッセイを行わないでください。
試薬が混ざり合ったり、汚染されたり、誤って調製されたりした。 正しい試薬が使用され、作業溶液が正しく調製され、汚染が発生していないことを確認してください。
プレートのウェルが汚染された。 シーラーを適切に使用してクロスウェル汚染を避ける。 プレート上の試薬に触れることなくマルチチャンネルピペットを使用してください。
TMB基質溶液が汚染された。 TMB基質溶液は、ウェルに添加する前に透明で無色でなければならない。ウェルに基質溶液をピペッティングする前に、きれいな容器を使用してください。