細胞質タンパク質免疫沈降/IP抗体

免疫沈降は、沈降可能なマトリックスに付着した特異的抗体に結合することによって抗原を単離する技術である。また、ゲル濾過や密度勾配沈降などの他の技術によって分離されたタンパク質分画を分析するためにも使用される。免疫沈降のための抗原の供給源は、非標識細胞または組織、代謝的または内在的に標識された細胞、またはインビトロ翻訳タンパク質であり得る。このユニットでは、種々の手段によって溶解された懸濁細胞または接着細胞を用いた広範囲の免疫沈降技術が記載された。通常、プラズマ導入された細胞または天然細胞は、免疫沈降のための理想的な試料である。

解糖を含む多くの代謝経路や細胞分裂などの過程のような、ほとんどの細胞活動が起こるのは細胞質内である。濃縮された内部領域は、小胞と呼ばれ、外層は、細胞皮質または外胚葉と呼ばれる。カルシウムイオンの細胞質内外への移動は、代謝プロセスのためのシグナル伝達活性であると考えられている。

細胞質抽出バッファー
10mM HepesまたはTris(pH7.5)
40mM KCL
2mMMgCl2
10%グリセロール
1mM NaPPi
1ug / mLペプスタチン
1μg/ mLアプロチニン
1ug / mLロイペプチン
1mM NaVO4
1mM NaF
1mM PMSF
水を50mLまで加える。

3〜5mLの細胞質抽出バッファーに沈殿物を再懸濁します。15mLのガラス乳棒に入れ、氷上で25〜30回粉砕します。4℃で2000rpmで5分間スピンダウンします。上清を除去し、マイクロ遠心チューブに移します。4℃で14,000rpmで15分間遠心分離します。上清を除去します。これが細胞質タンパク質溶液です。