ELISAアッセイを使って何が試験されていますか?

複数のエピトープを有するタンパク質を検出するには、サンドイッチアッセイが良い選択である。これは通常、異なるエピトープと反応する2つの抗体を必要とする。しかしながら、分子が複数の反復エピトープを有する場合、同じ抗体で捕捉し、検出することが可能である。あるいは、マイクロウェルに効果的に吸収することができる純粋な形態で検出される分析物の供給がある場合、競合アッセイを設定することができる。このアッセーでは、精製された分析物が固定され、試料中の分析物は固定化された分析物と一緒に標識された抗体に競合的に結合する。この場合、抗体が制限されるように抗体を滴定することが必須であり、そうしないとアッセイ感度が低下する。

ポリスチレンは、コーティング溶液中のそれらの濃度に依存して、多量のタンパク質とより多く結合する。各タンパク質の特定かつ最適な量を決定する必要があるが、いくつかの一般的な観察が抗体のためになされている。中低結合性プレートは典型的には100~200ng / cm2まで結合し、高結合プレートは典型的に400~500ng / IgG2まで結合することができる。タンパク質に加えて、ポリスチレンプレートは、一般に長さが15〜20アミノ酸のペプチドを吸収することができる。強い結合を達成するために、ペプチドの疎水性相互作用および親水性相互作用が必要である。典型的には、ペプチドを直接吸着する欠点はある。即ち、それらがエピトープをほとんど持たない傾向があり、これらがプラスチックとの相互作用に関与する場合、抗体がそれらに結合することは困難である。 1つの選択肢は、ペプチドとタンパク質との間の距離を提供するスペーサーアームを介してペプチドをより大きなタンパク質に結合させ、抗体がペプチドと相互作用することを可能にすることである。 

生物全体を検出する細菌アッセイまたはウイルスアッセイなどでも、同じ抗体を有するサンドイッチアッセイを使用して捕捉および検出することできる。標的分子が非常に小さいかまたは単一のエピトープからなる場合、上記の形式を変える必要がある。小分子自体は固相によく吸着しないか、または添加されたブロッキングタンパク質にマスクされる場合がある。しかし、一般的に、小分子はより大きなタンパク質に結合することができる。これは、抗体によってエピトープを結合させることができる立体配置で所望のエピトープを固相に付着させることを可能にした。

炭水化物および高度にグリコシル化されたタンパク質は、疎水性相互作用に関与する能力がほとんどないため、上記の力によってポリスチレンによく吸着しない。細胞から放出され、界面活性剤によって溶液中に維持された膜タンパク質も、界面活性剤の存在下で十分に吸着されない。共有結合または洗剤の濃度を下げることは、これらのタンパク質を連結させる最良の手段である。実際は、共有結合は、Tween-20およびTriton X-100のような界面活性剤の存在下で行うことができる。