セミドライ式ウェスタンブロット転写

セミドライ式ウェスタンブロットでは、迅速で効率的な転写を提供するために、電極をゲル/ニトロセルロース膜サンドイッチと直接接触させます。電気泳動緩衝塩および界面活性剤を除去するために、ポリアクリルアミドゲルは転写緩衝液中で平衡化しなければならず、ニトロセルロース膜および濾紙は事前に濡れされたもので、それは必要なすべての緩衝液です。転写を準備する際に、濾紙および膜に閉じ込められた余分な水分および気泡を排除することが重要で、通常はピペットが表面を転がしてこれを処理します。これを除いて、このプロセスの準備は非常に簡単です。

Semi-dry Western Blot transfer system
セミドライ式ウェスタンブロット転写システム

セミドライ式ウェスタンブロット転写の準備

必要な材料とバッファー

1X 転写バッファーを新しく調製します。
   1X 転写バッファーのレシピ(48 mM Tris base, 39 mM グリシン, 20 % メタノール):

1.0 Lの場合: 5.76 g Tris-base
2.95 g グリシン
200 mL メタノール
ddH2Oを1 Lまで加えます。

• PVDFまたはニトロセルロース膜。
• ゲルサイズに合わせたフィルターペーパー。

必要な機器

• 標準的な液体に基づくポリアクリルアミドゲル転写システム

セミドライ式ウェスタンブロット転写プロトコール

1 事前にニトロセルロースとフィルター/ブロット紙を準備します。
2 SDS / PAGEゲルをランニングした後、直ちにセミドライ式トランスファーバッファーを含む小さな容器にゲルを約15分間平衡化させます。
3 トランスファーバッファーに浸してブロットペーパーを完全に飽和させます。 この予め浸したブロット紙を白金アノード上に置きます。紙の表面上にピペットまたは試験管を回転させ(ローリングピンのように)て、すべての気泡を排除します。
4 平衡化したゲルをニトロセルロース膜の上に注意深く置き、スタックを可能な限り完全に整列させます。
5 別のブロット紙を浸し、ゲルの上に置き、ゲルとろ紙の間の気泡を注意深く除去します。
6 陰極板を注意深くスタックに置いてください。ゲル/ニトロセルローススタックを乱すことなく押して、ラッチをガイドポストに結合させます。
7 転写ユニットを320mAで1時間ランニングします。
8 転写が完了したら、電源を切り、膜に手が届くまでサンドイッチの層を剥がす。 鉗子で膜を取り外し、脱イオン水ですすいでください。