免疫沈降/IP-K562細胞ライセート

免疫沈降は、沈降可能なマトリックスに付着した特異的抗体に結合することによって抗原を単離する技術である。また、ゲル濾過や密度勾配沈降などの他の技術によって分離されたタンパク質分画を分析するためにも使用される。免疫沈降のための抗原の供給源は、非標識細胞または組織、代謝的または内在的に標識された細胞、またはインビトロ翻訳タンパク質であり得る。このユニットでは、種々の手段によって溶解された懸濁細胞または接着細胞を用いた広範囲の免疫沈降技術が記載された。通常、プラズマ導入された細胞または天然細胞は、免疫沈降のための理想的な試料である。

K562細胞株は、急性転化の 53歳の女性CML患者由来の最初のヒト不死化骨髄性白血病株である。K562細胞は、非付着性かつ丸みを帯びた赤白血病型のものであり、bcr:abl融合遺伝子に対して陽性であり、未分化顆粒球および赤血球といくつかのプロテオミクス類似点を有する。

培養物の中では、おそらくbcr:ablによる表面接着分子のダウンレギュレーションのために、他の多くの懸濁液よりもはるかに凝集が少ない。しかし、別の研究によれば、bcr:abl過剰発現が細胞培養プラスチックへの細胞接着の増加を引き起こす可能性があることが判明した。K562細胞は、初期の赤血球、顆粒球および単球と同様の性質を自然に持つことができる。また、NK活性を阻害するのに必要なMHC複合体を欠けるため、ナチュラルキラー細胞に容易に殺される。また、Epstein-Barrウイルスおよびヘルペスウイルスの痕跡も全くない。フィラデルフィア染色体の上およびそれ以上に、第15染色体の長腕と染色体17との間のsecond reciprocal translocationも示す。