免疫沈降/IP-HepG2細胞ライセート

免疫沈降 は、沈降可能なマトリックスに付着した特異的抗体に結合することによって抗原を単離する技術である。また、ゲル濾過や密度勾配沈降などの他の技術によって分離されたタンパク質分画を分析するためにも使用される。免疫沈降のための抗原の供給源は、非標識細胞または組織、代謝的または内在的に標識された細胞、またはインビトロ翻訳タンパク質であり得る。このユニットでは、種々の手段によって溶解された懸濁細胞または接着細胞を用いた広範囲の免疫沈降技術が記載された。通常、プラズマ導入された細胞または天然細胞は、免疫沈降のための理想的な試料である。

HepG2は、分化した肝細胞癌を有する15歳の白人男性の肝組織から単離したヒト肝癌細胞に由来する不死細胞株である。肝細胞癌は、世界で5番目の一般的な癌である。HepG2細胞の形態は上皮細胞であり、55の染色体対を有する。HepG2細胞は、大規模に首尾よく培養することができ、トランスファータンパク質、フィブリノーゲン、プラスミノーゲンおよびアルブミンなどの多くの血漿タンパク質を分泌することができる。HepG2細胞はまた、ヒト成長ホルモンで刺激することができ、単層細胞および小さな凝集体として増殖する接着性の上皮様細胞であり、免疫不全のマウスでは腫瘍化をもたらさない。HepG2細胞は、通常、肝臓癌関連タンパク質を産生するために使用される。細胞にプラスミドをトランスフェクトした後、数日培養してからタンパク質の精製ができる。