徹底的に検証済のIHC抗体

科学研究における抗体の再現性の重要性

 『自然』の統計によると、70%以上の研究者は試行しましたが、別の科学者の実験を再現できず、半数以上が自分の実験を再現できませんでした。再現性の欠如に寄与する主な要因の1つは、使用される試薬です。特に、抗体試薬は、出版データの再現性において重要な役割を果たします。

 Sino Biologicalの抗体はすべて独立して開発、製造されており、すべての検証結果が公開されています。お客様に信頼性の高い抗体を提供するために、我々は抗体品質の検証に多くの時間と費用を投資し、非常に厳格なQCプロセスと様々な分析方法を確立しました。

徹底的に検証済のIHC抗体

IHC抗体の例を取って、Sino Biological社の全ての抗体検証手順は以下のように示されています。

徹底的検証
抗原の設計 複数の実験対照 抗原ブロッキング 複数の組織 バッチ安定性

抗原の設計

自主開発、生産

• 500人以上のプロのチーム
• 10年間の高品質試薬研究開発経験
• 6,000以上の組換えタンパク質の大量の在庫
• 5つの組換えタンパク質生産プラットフォーム

85%は真核生物細胞

• 自然な構造に近い
• より良い生物活性
• 低い内毒素:<0.1 EU /μg(LAL測定)
• 高純度:> 95%(SDS-PAGE測定)

複数の実験対照

CD3抗体
A:ブランク対照 B:陰性対照 C:陽性対照

A:ブランク対照:二次抗体が特定の細胞コンパートメントに非特異的に結合しないことを確保するために、一次抗体は存在しません。
B:陰性対照:お望みのタンパク質は組織に存在しません。 したがって、このタイプの対照で染色が見られる場合、それは染色が非特異的であることを示します。
C:陽性対照:検出するタンパク質を発現することが知られている組織です。 陽性対照からの陰性の結果は、その手順が間違っていることを示します。

抗原ブロッキング

 

抗原ブロッキングとは、一次抗体と免疫原とのプレインキュベーションに基づいて抗体の特異性を確認する方法を意味する。組織が抗原ブロッキングを伴う染色を示さない場合、抗体がお望みの標的に特異的であるという強力な証拠である。
しかし特別な場合がある。例えば、免疫原がタンパク質全体である場合、抗体とタンパク質の混合物は、より高い非特異的染色をもたらし得るが、そのメカニズムはまだ不明である。

複数の組織

複数の組織のサンプル
CD3E    
  扁桃腺サンプル1   扁桃腺サンプル2   扁桃腺サンプル3
PSA    
  前立腺サンプル1   前立腺サンプル2   前立腺サンプル3
 
複数の組織のサンプル
CD3E    
扁桃腺   Hypognathadenitis   リンパ腫
     
  胸腺腫   前立腺    

あなたの標的タンパク質は異なる組織で発現する可能性がある。ところが、一般的に、異なる組織におけるひとつの抗体の染色結果は同じではありません。あなたはその抗体で組織内で望む標的タンパク質を検出できますか?これは実験の結果に直接影響します。抗体提供者が提供する検査組織は、あなたが研究したいサンプルと同じではない場合があります。したがって、抗体がサプライヤーに多くの組織タイプおよびサンプルで検証された場合、多くの情報を参照することがおすすめです。そうすると、実験が成功する可能性が高くなります。

バッチの安定性

厳格なロット間検証で再現性を確保する
CD3E    
  バッチ1   バッチ2   バッチ3
CD147    
  バッチ1   バッチ2   バッチ3
 
抗体安定性の検証
CD3E    
生産されたばかりの頃   一年後   二年後

免疫された動物に避けられない相違が存在するため、ポリクローナル抗体の異なるバッチは、IHC染色において同じ性能を発揮しない可能性がある。モノクローナル抗体は、同じBリンパ球によって分泌されるものだが、細胞培養条件および抗体精製方法の変化は、抗体特性の変化をもたらし得る。従って、ポリクローナル抗体であろうとモノクローナル抗体であろうと、バッチ間の抗体の安定性は非常に重要である。