4.最悪の場合: Co-IPは成功しません。

いくつかの場合、co-IPはタンパク質相互作用の発見および/または確認には成功しない。Co-IPは、高親和性相互作用に最も有用である。低親和性または一過性の相互作用が検出されない場合、一般的に、co-IPは架橋などのさらなる最適化なしで機能しなくなる。
場合によっては、結合特性を保持しながらタンパク質の効率的な抽出を可能にする方法では、溶解条件を単純に最適化することはできない。しかし、あなたが選ぶことができる多くの代替技術があるが、例えばプルダウンアッセイ(co-IPに似ている)、抗体の代わりに相互作用対の餌タンパク質が固定化されている(一般的に、餌は、 IPにおけるネイティブの対応物よりはるかに多い量で存在する)。それからは標識転写(特に一時的な相互作用に有用)、Far-Western、タンパク質アレイなど。

1.あなたのIPテストと検出のための陽性&陰性コントロールを設定することをお勧めします。
2.私たちのアドバイスは、必要に応じてIPバッファと検出バッファを1つずつ確認することです。
3. ライゼートの日付、保存時間、凍結および融解の記録をチェックしてください。保存時間が長すぎると、タンパク質が分解されている可能性があります。また、細胞溶解物が数回凍結融解された場合も分解されている可能性があります。

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1. IP後はタンパク質が検出されなかった
2. バックグラウンドが高い (特異的または非特異的)
3. 抗体断片は目的のシグナルを遮断する
4. 最悪の場合: Co-IPは成功しない
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