1. 私のブロットには複数のバンドがあるのはなぜですか。

1. 私のブロットには複数のバンドがあるのはなぜですか。

いくつかの 変数はこれを解釈できます。
a.過剰量のライセートがゲルにロードされると、余分なバンドが生じる可能性があります。ライセートの希釈液を減少させることは、最適なローディング量を決定するのに役立ちます。 洗浄サークルを増加させることにより、この問題を緩和することもできます。
b.より低い分子量の生成物はタンパク質分解に起因する可能性があります。私たちは、推奨プロトコールに従って細胞/組織を溶解することにより、新鮮なサンプルを調製することを提案します。 実験サンプルのシグナルをポジティブコントロールと比較してください。
c.非特異的バンドは二次抗体に起因する可能性があります。一次抗体なしの対照を行うことを提案します。つまり、一次抗体をインキュベートせずに、二次抗体を適切な割合で希釈してから直接にインキュベートする。二次検出システムのみでプローブすることを推奨します。
d. より高分子量の生成物は、グリコシル化、ミリスチル化、リン酸化、および/またはユビキチン化を含む(しかし、これらに限定しない)翻訳後タンパク質修飾の結果である可能性があります。
e. さらに、より高分子量のバンドは、SDSおよび沸騰によって分解できないタンパク質凝集の結果である可能性があります。

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